湿疹 野菊花 金银花 板蓝根、野菊花、金银花和甘草及复合提取液对鸡大肠杆菌的体外抑



     鸡大肠杆菌病是一种常见细菌性传染病,主要发生在雏鸡和成年产蛋鸡开产阶段,其防治手段主要是使用抗菌药和抗生素,但长期使用化学药物会导致细菌耐药性、药物毒副作用、药物残留所致的畜产品安全等问题。此外,畜产品无公害化生产的要求,使抗生素的选择范围越来越小。而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小,毒性小,副作用小、几乎无残留[1],因此研究使用中药防治鸡大肠杆菌病有重要的现实意义。

  板蓝根为十字花科植物菘蓝的根,具有清热解毒、凉血利咽、抗菌、抗病毒、增强免疫及抗内毒素等作用;野菊花为菊科多年生草本植物野菊的头状花序,具有清热解毒的作用;金银花为忍冬科植物忍冬的花蕾,具有清热解毒,疏散风热,凉血止痢,降血降火,消咽利膈之功效;甘草双子叶植物豆科胀果甘草或光果甘草的根及根茎,具有抗炎、抗病毒,和保肝解毒及增强免疫功能等作用。但有关板蓝根、野菊花、金银花和甘草对鸡大肠杆菌抗菌作用的报道较少,对复方研究几乎没有,这与中药应用的客观现象不符合,中药应用绝大部分都是复方,因此加强中药复方抗菌活性的研究对于中药资源的开发、利用具有重要的意义。本试验以单味板蓝根及其笔者自拟组方进行体外抑菌效果研究,为中药复方的应用提供一定的理论基础。

  1 材料与方法

  材料:板蓝根、金银花、野菊花、甘草(购于南宁市药材站);蛋白胨、营养琼脂、牛肉浸膏、氯化钠、雏鸡(7日龄)、大肠杆菌菌株(临床分离株Ecoli.01)。

  方法:药液的制备。

  板蓝根提取液的制备。取板蓝根100g,加1000ml的蒸馏水水煎(第一次1.5小时,第二次1小时),合并两次板蓝根水煎液,然后将板蓝根水煎液浓缩至药液浓度1g/ml,真空抽滤得滤液。

  野菊花提取液的制备。 取野菊花100g,加50%乙醇(无水分析纯配制)浸泡12小时,80℃水浴热浸提4小时,滤去残渣,滤液用文火浓缩至100ml(即1ml相当于1g),调节PH值至7.0,备用。

  金银花提取液的制备。取金银花100g,破碎后置于磨口圆底烧瓶中,加70%乙醇(无水分析纯配制)热回流浸提,用调温电热套加热至微沸状态,热回流2次(第一次1小时,第二次0.5小时),得浸提液备用。

  甘草提取液的制备。称取甘草粉末100g,加入蒸馏水1000ml在沸水浴中提取3次,滤去甘草渣,合并提取液,离心得上清液,减压浓缩至100ml,真空抽滤得滤液备用。

  大肠杆菌菌液制备与浓度测定。菌种复壮后,采用平皿表面活菌计数法确定菌液浓度,使细菌原液浓度达9亿个/ml。

  复合提取液的配制。按照正交设计法确定各提取液组合的浓度,将上述4种提取液按表1的方案分别进行组合,灭菌,备用。

 湿疹 野菊花 金银花 板蓝根、野菊花、金银花和甘草及复合提取液对鸡大肠杆菌的体外抑
  抑菌试验。采用琼脂打洞扩散法。分别挑取菌落于无菌生理盐水中混匀,配制成106个/ml菌悬液(比浊法配制)。吸取1:50的稀释菌液1ml注入直径为9cm的灭菌培养皿中,每个菌种加入1个培养皿,随后注入45℃~50℃的灭菌营养琼脂20ml,立即充分旋转混匀,待琼脂凝固后,用外径为6mm的打孔器在培养基上打孔,再用灭菌滴管吸取融化的无菌营养琼脂液,每孔滴入1~2滴,作补孔用,以免底部漏液。用微量加样器各加入50ul药液,同时作空白对照。36℃恒温培养16小时~18小时,每个菌种做3个平行样本,以3次平均值为抑菌圈直径;判断各种药液对大肠杆菌的抑菌效果。抑菌圈直径>20mm为极敏。抑菌圈直径15~20mm为高敏,抑菌圈直径10~15为中敏,抑菌圈直径<10为低敏,无抑菌圈为不敏感[2]。

  2 结果与分析

  四种中药对大肠杆菌的体外抑菌试验。由表2可知,板蓝根、金银花、野菊花、甘草对大肠杆菌都有明显的抑菌作用,但三者之间无显著差异;相对其它三种中药板蓝根对大肠杆菌的体外抑菌较敏感。

复合提取液对大肠杆菌的体外抑菌试验。 由表3可知野菊花提取液浓度对抑菌圈直径的影响最大,其次为板蓝根,再次金银花;复合提取液抑菌效果最佳的浓度配比为板蓝根1.0g/ml、金银花1.0g/ml、野菊花2.0g/ml,甘草0.5g/ml。甘草对细菌的影响较小,其主要作用在于协调相互间的作用,从中药君、臣、佐、使的投药习惯考虑也可选择复合提取液浓度配比为板蓝根1.0g/ml、金银花1.0g/ml、野菊花2.0g/ml,甘草1.0g/ml。

  3 结论与讨论

  不同单味药对大肠杆菌的抑菌作用存在差异。试验中四种药物体外抑菌试验中发现板蓝根、金银花、野菊花和甘草均具有较强的抑菌效果,但三者之间无显著差异。

  不同组方对大肠杆菌的体外抑菌作用存在差异。不同组方由4种单味药进行组方,结果不同组方对大肠杆菌的抑菌作用有差异,综合从开发复合制剂效果、生产成本及传统用药习惯等角度考虑,建议以板蓝根:金银花:野菊花:甘草为1.0g/ml:1.0g/ml:2.0g/ml:1.0g/ml作为指导用药方案。

  

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